Turinys

• Pagrindinis skirtumas
• Pietų pūtimas prieš Vakarų balinimas
• Palyginimo diagrama
• Kas yra Pietų pūtimas?
• Kas yra Vakarų blotingas?
• Pagrindiniai skirtumai
• Išvada

Pagrindinis skirtumas

Pagrindinis skirtumas tarp Southern ir Western blotting yra tas, kad Southern blotting yra metodas, naudojamas specifiniam DNR fragmentui aptikti tam tikrame mėginyje, tuo tarpu Western blotting yra naudojamas tam tikro mėginio baltymui nustatyti.

Pietų pūtimas prieš Vakarų balinimas

Blotinimas yra technika, kuria naudojasi mokslininkai, norėdami atskirti skirtingų tipų molekules nuo mišinio ar mėginio. Taikant šį metodą, makromolekulės, tokios kaip nukleorūgštys (DNR ir RNR), ir baltymai mišinyje juda per gelio plokštę. Čia minutės dalelės judės greičiau nei didesnės. Šios molekulės prispaudžiamos prie imobilizuotos membranos paviršiaus, kuris perkelia molekules į membraną. Nustatant konkrečią medžiagą, yra įvairių tipų blotinimo, t. Y. Pietų, šiaurinis ir vakarinis. Pietų blotinimas yra toks blotinimo būdas, kuris naudojamas aptikti DNR, o vakarinis blotinimas - baltymams išsiaiškinti. Southern blotting buvo sukurtas Edward M. Southern 1975 m. Taigi, jis žinomas kaip Southern blotting. Kita vertus, vakarų blotinimą sukūrė George'o Starko grupė Stanfordo universitete 1979 m. Šis vardas buvo naudojamas suderinti su pietų blotinimu. Southern blotinimas naudojamas specifinei DNR sekai išsiaiškinti, tuo tarpu Western blotting yra naudojamas specifinei aminorūgšties arba baltymo sekai išsiaiškinti.

Palyginimo diagrama

Kas yra Pietų pūtimas?

Pietinis pūtimas yra seniausias pūtimo metodas, kurį suteikė Edvinas Pietinis, pavadintas pietiniu pūtimu. Jis naudojamas norint sužinoti konkrečią DNR seką tam tikrame mėginyje ar mišinyje. Pietinio pūtimo metu atliekami elektroforezė, perkėlimas ir specifinių sekų aptikimas. Visų pirma, DNR yra suskaidoma naudojant specifinį restrikcijos fermentą. Tada gelio elektroforezės būdu atskirti norimi DNR fragmentai. Šie fragmentai denatūruojami naudojant šarminį tirpalą, pvz., NaOH ir kt., Kad būtų atskirtos dvi DNR grandinės. Tuomet šie viengrandiai DNR fragmentai pernešami ant membranos atliekant blotinimą. Ši membrana apribota DNR apdorojama pažymėtu zondu. Šis zondas pritvirtins prie savo papildomos grandinės ant membranos DNR, kurią galima vizualizuoti autoradiograma ir kt.

Kas yra Vakarų blotingas?

„Western blotting“ metodą išrado George'o Starko grupė Stanfordo universitete, kuris naudojamas nustatyti specifinę aminorūgščių seką baltyme. Jis taip pat žinomas kaip baltymų blotimas arba imuninės sistemos blotinimas. Vakarų balinimo momentai yra elektroforezė, perkėlimas ir specifinių baltymų aptikimas. Pirmiausia homogenizuokite mišinį. Tada elektroforezės būdu atskirkite dominančią molekulę. Perkelkite šias molekules ant membranos ir, naudodami specifinį zondą, nustatykite specifinį baltymą.

Pagrindiniai skirtumai

1. Metodas, kuris naudojamas norint sužinoti specifinę DNR seką tam tikrame mišinyje, yra žinomas kaip pietinis blotinimas, tuo tarpu metodas, kuris naudojamas norint sužinoti konkretaus baltymo aminorūgščių seką tam tikrame mišinyje, yra žinomas kaip pietinis blotinimas.
2. Pietinis blotinimas buvo sukurtas Edvardo M. Southerno 1975 m., Žinomas kaip pietinis blotinimas. Kita vertus, vakarų blotinimą sukūrė George'o Starko grupė Stanfordo universitete 1979 m.
3. Southern blotinimas naudojamas norint sužinoti specifinę DNR seką. Atvirkščiai, Western blotting yra naudojamas norint sužinoti konkrečią aminorūgščių ar baltymų seką.
4. Pietinis blotinimas veikia hibridizacijos principu atvirkštinėje pusėje; Western blotting veikia imunodetekcijos metodo arba antigeno ir antikūnų sąveikos principu.
5. Vienos grandinės DNR arba kartais RNR naudojama kaip zondas, atliekant pietų blotinimą iš kitos pusės, vakarų blotinimo metu kaip zondas naudojami pirminiai ir antriniai antikūnai.
6. Agarozės gelio elektroforezė naudojama atliekant pietų blotinimą, o SDS PAGE / poliakrilamido gelis - baltymams atskirti atliekant vakarinį blotinimą.
7. Kita vertus, pietų pūtimas atliekamas po kapiliarų pernešimo; Vakarų blotingas atliekamas pagal elektros perdavimo procedūrą.
8. Pietų blotinimo metu mėginys turi būti denatūruotas, tuo tarpu vakarinio blotinimo metu mėginys turėtų būti jo gimtosios būsenos.
9. Atliekant pietų blotinimą iš atvirkštinės pusės, nereikia atlikti jokio tokio blokavimo, kaip vakarinio blotinimo metu nespecifinės antikūnų vietos užblokuojamos ant nitroceliuliozės popieriaus, naudojant pieno miltelius arba galvijų serumo albuminą (BSA).
10. Įprasti ženklinimo metodai, naudojami pietiniame blotinime, yra chromogeninių dažų naudojimas arba radioaktyvusis ženklinimas arba fluorescencinis ženklinimas ir tt, tuo tarpu Vakarų blotinimas naudojamas fluorescenciniu antikūnu arba radioaktyviu žymėjimu, chromogeniniais dažais arba diaminobenzidino susidarymu.
11. Šviesos aptikimas, autoradiografas ir spalvos pokyčiai naudojami kaip aptikimo metodai pietų blotinimo metu, tuo tarpu aptikimo metodai vakariniame blotkinime yra spalvos pokyčiai ir šviesos aptikimas ir kt.
12. Pietų blotinimas naudojamas DNR aptikimui, tėvystės tyrimams, DNR pirštų nustatymui, aukos identifikavimui, nusikaltėlių identifikavimui, infekcijos sukėlėjų paieškai ir mutacijos ar genų persitvarkymo nustatymui ir kt. Atvirkščiai, vakarų blotinimas naudojamas baltymų skaičiui nustatyti. mišinys, siekiant nustatyti ŽIV, viruso, bakterijų ir kt. kiekį serume, išsiaiškinti baltymų trūkumą ir naudojamas kaip neabejotina priemonė herpeso, hepatito B, Laimo ligos, Kreutzfeldto-Jokūbo ligos ir kt.

Išvada

Aukščiau pateiktoje diskusijoje apibendrinta, kad pietų blotinimas yra seniausias blotinimo būdas, naudojamas mėginio specifiniam DNR segmentui išsiaiškinti, tuo tarpu vakarinis blotinimas buvo aptiktas pastarojo metodo metu ir naudojamas specifinei aminorūgščių sekai ar konkrečiam baltymui nustatyti.